Рекомбинантни протеински антигени често имају неколико различитих епитопа, од којих су неки епитопи секвенце, а неки структурни епитопи.Поликлонска антитела добијена имунизацијом животиња денатурисаним антигенима су мешавине антитела специфичних за појединачне епитопе и могу се генерално користити за откривање природних структура или денатурисаних циљних протеина.Нежељена корист од употребе денатурисаних протеина као имуногена је да денатурисани протеини имају тенденцију да буду имуногеничнији и могу да стимулишу јак имуни одговор код животиња.
Експресиони систем Есцхерицхиа цоли се обично бира за антигенске сврхе јер је то најскупљи систем у смислу времена и новца.Да би се побољшала могућност експресије циљног протеина и погодност пречишћавања, понекад се експримира само мали фрагмент циљног протеина, као што је специфични домен.
Тродимензионална структура протеина
Специфични домен протеина
Ако је сврха припреме антитела искључиво за детекцију вб, економично је и брзо користити синтетички мали пептид као антиген, али постоји ризик од слабе имуногености или нерегености услед неодговарајућег одабира пептидног сегмента.Пошто припрема антитела захтева дуг период, два или три различита пептидна сегмента се често бирају за припрему антитела коришћењем полипептидног антигена да би се обезбедила стопа успеха експеримента.
Чистоћа полипептидног антигена за имунизацију мора бити већа од 80%.Иако већа чистоћа теоретски може да добије антитела са бољом специфичношћу, у пракси животиње увек производе велики број неспецифичних антитела, чиме се маскирају предности чистоће антигена.
Поред тога, припрема антитела из малих пептида мора бити унакрсно повезана са одговарајућим антигеном носача да би се побољшала његова имуногеност.Два уобичајена антигена носиоца су КЛХ и БСА.
Време поста: 23. март 2023