Пренос енергије флуоресцентне резонанце (ФРЕТ)
Пренос енергије флуоресцентне резонанције (ФРЕТ) је процес преноса енергије без зрачења у коме се енергија побуђеног стања донора преноси у побуђено стање акцептора кроз интеракцију интермолекуларних електричних парова.Овај процес не укључује фотоне и стога није радиативан.Овај тест има предности што је брз, осетљив и једноставан.
Боја која се користи у ФРЕТ тесту може бити идентична.Али у већини апликација се заправо користе различите боје.Укратко, пренос енергије светлеће резонанције је пренос пара дипола са донора (боја 1) на акцептор (боја 2) када је донорска група узбуђена.Генерално, емисиони спектар групе Донор флуорофора се преклапа са спектром апсорпције групе Аццептор.„Када је растојање између два флуорофора одговарајуће (10-100 А), може се посматрати пренос енергије флуорофора од донора до акцептора.Начин преноса енергије зависи од хемијске структуре рецептора:
1. Претвара се у молекуларну вибрацију, односно нестаје светлосна светлост преноса енергије.(Рецептор је гаситељ светлости)
2. Емисија је интензивнија од самог рецептора, што резултира црвеним помаком у секундарном спектру флуоресценције.“(Рецептори су емитери светлости).
Група донора (ЕДАНС) и акцепторски ген (ДАБЦИЛ) су једнолично повезани са природним супстратом ХИВ протеазе, а када супстрат није искључен, ДАБЦИЛ може да угуши ЕДАНС и затим постане неоткривен за флуор.Након прекида везе са ХИВ-1 протеазом, ЕДАНС више не гаси ДАБЦИЛ, а ЕДАНС луциферазе се могу накнадно открити.Доступност инхибитора протеазе може се пратити променама у интензитету флуоресценције ЕДАНС-а.
ФРЕТ пептиди су погодни алати за проучавање неспецифичности пептидазе.Пошто се његов реакциони процес може континуирано пратити, он пружа погодан метод за откривање активности ензима.Сјај који настаје након хидролизе пептидних веза од стране донора/акцептора даје меру ензимске активности при наномоларним концентрацијама.Када је ФРЕТ пептид нетакнут, показује изненадни нестанак унутрашњег блица, али када се било која пептидна веза наспрам донора/акцептора прекине, ослобађа се бљесак, који се може детектовати континуирано и активност ензима се затим може квантификовати.
Време поста: 14.08.2023